Pecyn PCR Amser Real Feirws Mwnci
Manylion Cynnyrch
Defnydd arfaethedig
Mae'n cael ei ddefnyddio ar gyfer canfod Feirws Mwnkeypox mewn serwm dynol neu samplau exudate briwiau trwy ddefnyddio systemau PCR amser real.
Prawf Egwyddor
Mae'r cynnyrch hwn yn system profi PCR amser real Taqman® sy'n seiliedig ar stiliwr fflwroleuol.Mae preimwyr a stilwyr penodol wedi'u cynllunio ar gyfer canfod genyn F3L o Feirws Mwnci.Mae rheolaeth fewnol sy'n targedu'r genyn a gedwir gan bobl yn monitro'r casgliad sampl, trin samplau a phroses PCR amser real i osgoi canlyniadau ffug-negyddol.Mae'r pecyn yn system lyophilized llawn premix, sy'n cynnwys deunyddiau sydd eu hangen ar gyfer canfod Firws Mwnkeypox: ensym mwyhau asid niwclëig, ensym UDG, byffer adwaith, paent preimio penodol a stiliwr.
Prif Gynnwys
Rhestrir y cydrannau a ddarperir yn y tabl.
| Cydrannau | Pecyn | Cynhwysyn |
| Firws brech y mwnciPremix Lyophilized | 8 stribed tiwbiau PCR× 6 codenni | Preimwyr, stilwyr, dNTP/dUTP Mix, Mg2+, Taq DNA polymeras, UDG Enzyme |
| MPV Rheolaeth Bositif | 400 μL × 1 tiwb | Dilyniannau DNA sy'n cynnwys genyn Targed |
| MPV Rheolaeth Negyddol | 400 μL × 1 tiwb | Dilyniannau DNA sy'n cynnwys segment genyn dynol |
| Datrysiad Toddi | 1 ml × 1 tiwb | Sefydlogwr |
| Tystysgrif Cydymffurfiaeth | 1 darn | / |
Llif Gweithrediad
1. SamplCasgliad:Dylid casglu sbesimen i mewn i diwbiau di-haint yn unol
gyda manylebau technegol safonol.
2. Paratoi Adweithydd (Ardal Paratoi Adweithydd)
Tynnwch gydrannau'r pecyn a'u cydbwyso ar dymheredd yr ystafell i'w defnyddio wrth gefn.
3. Prosesu Sbesimen (Ardal Prosesu Sbesimen)
3.1 Echdynnu asid niwcleig
Argymhellir cymryd samplau hylif 200μL, Rheolaeth Bositif a Rheolaeth Negyddol ar gyfer echdynnu asid niwclëig, yn unol â gofynion a gweithdrefnau cyfatebol pecynnau echdynnu DNA firaol.
3.2 Hydoddi powdr lyophilized ac ychwanegu templed
Paratowch rhag-gymysgedd Feirws Brech Mwnci Lyophilized yn ôl nifer y samplau.Mae angen un tiwb PCR ar un sampl sy'n cynnwys powdr premix Lyophilized.Dylid trin rheolaeth negyddol a rheolaeth gadarnhaol fel dau sampl.
(1) Ychwanegu Ateb Hydoddi 15μL i bob tiwb PCR sy'n cynnwys premix Lyophilized, yna ychwanegu samplau wedi'u tynnu 5μL / Rheolaeth Negyddol / Rheolaeth Gadarnhaol i bob tiwb PCR yn y drefn honno.
(2) Gorchuddiwch diwbiau PCR yn dynn, ffliciwch tiwbiau PCR â llaw nes bod powdr lyophilized wedi'i doddi'n llwyr a'i gymysgu, casglwch yr hylif i waelod tiwbiau PCR trwy allgyrchiad cyflym isel ar unwaith.
(3) Os ydych chi'n defnyddio offeryn PCR amser real cyffredin i'w ganfod, yna trosglwyddwch tiwbiau PCR yn uniongyrchol i'r ardal ymhelaethu;os defnyddiwch BTK-8 i'w ganfod, yna mae angen cyflawni'r gweithrediadau canlynol: trosglwyddo 10 μL hylif o'r tiwb PCR i'r ffynnon sglodion adwaith o BTK-8.Mae un tiwb PCR yn cyfateb i un ffynnon ar y sglodion.Yn ystod gweithrediad pibellau, sicrhewch fod y pibed yn 90 gradd fertigol.Dylid gosod blaenau'r pibed rhwystr aerosol yng nghanol y ffynnon gyda grym cymedrol a rhoi'r gorau i wthio'r pibed pan fydd yn cyrraedd y gêr cyntaf (er mwyn osgoi swigod).Ar ôl i'r ffynhonnau gael eu llenwi, tynnwch bilen sglodion adwaith i orchuddio'r holl ffynhonnau ac yna caiff y sglodyn ei drosglwyddo i'r man canfod mwyhad.
4. Ymhelaethiad PCR (Ardal Ddarganfod)
4.1 Rhowch y tiwbiau PCR/sglodyn adwaith yn y tanc adwaith a gosodwch enwau pob adwaith yn dda yn y drefn gyfatebol.
4.2 Gosodiadau fflworoleuedd canfod: (1) firws brech y mwnci (FAM);(2) Rheolaeth Fewnol (CY5).
4.3 Rhedeg y protocol beicio canlynol
Protocol ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
| Camau | Tymheredd | Amser | Beiciau | |
| 1 | Cyn-denatureiddio | 95 ℃ | 2 funud | 1 |
| 2 | Dadnatureiddio | 95 ℃ | 10 s | 45 |
| Anelio, ymestyn, caffael fflworoleuedd | 60 ℃ | 30 s | ||
Protocol BTK-8:
| Camau | Tymheredd | Amser | Beiciau | |
| 1 | Cyn-denatureiddio | 95 ℃ | 2 funud | 1 |
| 2 | Dadnatureiddio | 95 ℃ | 5 s | 45 |
| Anelio, ymestyn, caffael fflworoleuedd | 60 ℃ | 14 s | ||
5. Dadansoddiad canlyniadau (cyfeiriwch at y Llawlyfr Defnyddiwr Offeryn ）
Ar ôl yr adwaith, bydd y canlyniadau'n cael eu cadw'n awtomatig.Cliciwch “Dadansoddi” i ddadansoddi, a bydd yr offeryn yn dehongli gwerthoedd Ct pob sampl yn awtomatig yn y golofn canlyniad.Rhaid i'r canlyniadau rheoli negyddol a chadarnhaol gydymffurfio â'r canlynol "6. Rheoli Ansawdd".
6. Rheoli Ansawdd
6.1 Rheolaeth Negyddol: Dim Ct neu Ct> 40 yn sianel FAM, Ct≤40 yn sianel CY5 gyda chromlin chwyddo arferol.
6.2 Rheolaeth Gadarnhaol: Ct≤35 yn sianel FAM gyda chromlin ymhelaethu arferol, Ct≤40 yn sianel CY5 gyda chromlin ymhelaethu arferol.
6.3 Mae'r canlyniad yn ddilys os bodlonir yr holl feini prawf uchod.Fel arall, mae'r canlyniad yn annilys.
Dehongliad Canlyniad
Mae'r canlyniadau canlynol yn bosibl:
| Gwerth Ct sianel FAM | Ct gwerth sianel CY5 | Dehongliad | |
| 1# | Dim Ct na Ct>40 | ≤40 | Firws brech y mwnci yn negatif |
| 2# | ≤40 | Unrhyw ganlyniadau | Firws brech y mwnci yn bositif |
| 3# | 40～ 45 | ≤40 | Ail-brawf;os yw'n dal i fod yn 40 ~ 45, rhowch wybod fel 1 # |
| 4# | Dim Ct na Ct>40 | Dim Ct na Ct>40 | Annilys |
NODYN: Os bydd canlyniad annilys yn digwydd, mae angen casglu a phrofi'r sampl eto.
Gwybodaeth Archeb
| Enw Cynnyrch | Cath.Nac ydw | Maint | Sbesimen | Oes Silff | traws.& Sto.Temp. |
| Pecyn PCR Amser Real Feirws Mwnci | B001P-01 | 48 prawf/cit | Exudate Serwm/ Lesion | 12 Mis | -25 ～-15 ℃ |
